如果流式筛选GFP阳性细胞内的敲除率那么高（16/18），单克隆扩增后是否可以直接裂解提蛋白，做WB验证呢？我不想知道编辑的碱基数和位置，只想知道蛋白敲除后细胞表型的变化？
查资料后发现“单纯用wb验证可能存在问题，因为cas9/sgRNA进行基因编辑时，可能通过切除非3倍数的碱基，造成移码突变，翻译出突变的蛋白，而抗体的原理是识别蛋白的某个序列或者某个空间构象。这样就算成功进行了基因编辑，WB时还可能造成抗体能够识别突变后的蛋白的情况，造成WT和KO的细胞系WB条带结果时无明显变化。” 而且抗体还存在非特性识别其他抗原的情况，你看到的蛋白并非你研究的目的蛋白。
现在快速建立单克隆的方法是gRNA+cas9蛋白电转，然后挑单克隆96孔板，相比大皿转慢病毒，puro筛选，稀释96孔板的优势是什么？转染效率高？cas9蛋白不整合，不会有后面的潜在的影响，比如cas9整合位点截断了某个基因，稀释到96孔板后可以直接看gfp，单克隆加gfp就能确定是转染成功，然后挑30个克隆，能拿到一两个成功编辑的克隆？
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