2022年11月6日
发表者 kimi1006
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从DSD到美学修复的实现 近年来DSD火遍中国大江南北，成为美学修复牙医的标志，医患沟通的利器。但临床上从二维图片到三维的实现，却没有[……]
2022年11月6日
发表者 kimi1006
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年轻牙医作为职场新手 ,圈内人因你的资历尚浅对技艺有所保留,接诊患者会因你的经验不多有所质疑。若你有类似困惑，这堂课一定
能让您大有斩获！
善于运用新技术、新理念到临床工作中的青年牙医代表吕伶君讲师，为我们带来了DSD微笑设计全攻略。这项时尚又实用的医患通吃技能。
DSD微笑设计
DSD全称为Digital smile design，是当前较为前沿的前牙美学分析和修复设计的重要手段，在美学分析诊断基础上，借助计算机进行
可视化的牙齿美学修复设计，之后通过诊断蜡型，诊断饰面并将设计表达呈现在患者口腔内，使患者能够直观的看着自己微笑的变[……]
2022年11月6日
发表者 kimi1006
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看了几遍外国人用keynote制作DSD的教程，正好手里有她这个教程的模版，索性就做了几遍，第三[……]
2022年9月29日
发表者 kimi1006
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2.插入片段PCR扩增
插入片段扩增可用任意PCR酶扩增，无需考虑产物末端有无A尾 (重组过程中将被去除，在最终载体中不会出现)。但为了减少扩增突变的引入，建议使用高保真聚合酶进行扩增（Hieff Canace® High-Fidelity DNA Polymerase，Cat No. 10135ES）。
[……]
2022年9月18日
发表者 kimi1006
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设计完sgRNA之后，就可以选择性克隆到此目的载体了。在这里我们选择lentiCRISPR v2载体作为例子说明。lentiCRISPRv2是张锋实验室发布一个慢病毒载体系统，cas9和sgRNA表达框在同一载体上。而且Cas9的C端带有FLAG融合标签，载体包含Puromycin抗性基因，适合建稳转系（图21）。验证sgRNA活性的时候也适合顺转；包装成慢病毒适合常规细胞系的建系。构建非常方便。该载体具体特征如下：
克隆gDNA使用BsmBI位点，载体可以切出一个~1.9 kb的filler片段，便于确认酶切成功并利于载体回收（图2[……]
2022年9月18日
发表者 kimi1006
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1. CRISPR/Cas9核酸酶切靶序列原理图
2 相关载体图谱
2.1 中间载体 ，sgRNA载体（预设有BbsI酶切位点）
中间载体↑
2.2 CRISPR/Cas9骨架载体，表达CAS9，同时有完整的sgRNA表达框
含有CAS9的骨架载体（骨架载体可以换成PX459、PX461，PX462、lenticrispr V2、lentiguide-puro或者其他同种gRNA scaffold的质粒）
3. 基因组靶位点选择和双链接头设计
3.1 靶位点选择
根据目的基因的物种在sgRNA设计网站上是设计靶点序列，根据需要选择特异性好[……]
2022年9月18日
发表者 kimi1006
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2022年9月18日
发表者 kimi1006
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2022年9月18日
发表者 kimi1006
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CRISPR-Cas9系统是目前最流行的基因组编辑技术，可以实现目的基因的敲除、插入和突变，该技术是一种由RNA指导Cas蛋白对靶基因定性修饰技术。科学家为了让Cas蛋白定向剪切DNA序列，在CRISPR工作机理的基础上，人为重组了一段目的基因的sgRNA（small-guide RNA），在sgRNA的引导下，Cas9蛋白可以实现对目的基因的定向切割。本文主要介绍，目的基因sgRNA设计和如何将sgRNA构建到CRISPR-Ca[……]
2022年9月18日
发表者 kimi1006
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