科学院博士手把手教你做免疫组化定量分析

科学院博士手把手教你做免疫组化定量分析

2017-12-03 07:00

做个生物实验也是够苦逼的啊,不止结果要好看光鲜,还要做定量……也是醉了。明明 western blot 结果做的那么漂亮,一眼就看出来差异了,还需要定量?!思量起来,这个也还算简单,忍了吧。。。

but…辛辛苦苦做的免疫组化(或荧光)也需要定量——你当搬砖就可以随便使唤了吗?花花绿绿,斑斑驳驳,肿么分析

还好,我有这本秘籍,一定要看完哦。

进入正题

准备工作

首先,你需要下载 imageJ,然后下载 IHC-Toolbox 插件,并放入 imageJ 的安装目录下的 plugins 文件夹下;

送链接:https://imagej.nih.gov/ij/plugins/ihc-toolbox/index.html

开始分析

1. 在菜单栏里选择文件打开,打开实验数据图片(此处所使用图片来自互联网,大家可用自己的数据实战);然后在 plugins 菜单下 → 选择 IHC Toolbox,打开如下:

2. 选中感兴趣的区域(ROI),然后点击 Training;(这里选择的区域一定要有代表性,范围不可太大,也不能太小)

3. 上步完成后会弹出 Color Chooser 窗口,滑动滑块儿以使感兴趣的区域全部被选中;

4. 调整图片格式,改成 8 bit 灰度图片,彩色的好看但是不支持哦;(你也可以改成 16 bit 的哈,忘了修改软件会蹦出提示的)

调整完后,大概就是酱纸。

5. Image → Adjust → Threshold… 打开调整阈值窗口;

6. 滑动滑块儿使红色覆盖所选区域,其实就是告诉软件你要分析哪些区域,有点像 ps 中的魔棒?… 反正赶脚很傻瓜;

7. 然后就到了黎明前的最后一哆~嗦~了,告诉软件你要分析面积还是灰度值,此处我们以面积为例(一定记得要选中 limited to Threshold 哦,切记!切记!)不蓝,分析的是整个图的面积,就是整个图片的像素长宽之积:1392 x 1040

8. 最后一步就是出数据来 Analyze → Measure,也可以用快捷键 Ctrl + M,然后保存数据就好了,是不是既简单又实用呢?

第一次写教程,心里还有点忐忑呢,没有说清楚的地方希望大家留言交流。你的支持就是我最大的动力。

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作者:wangnan235

图片来源:wangnan235

题图来源:丁香通返回搜狐,查看更多

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