循环冻融和不同的保存条件对肿瘤样本组织中RNA、DNA和蛋白质质量的影响

2015-12-01

摘要:

背景:高质量的肿瘤样本组织对实验研究尤其是分子实验至关重要。根据实验室的条件,通常选用不同的存储方法来保证样本组织的质量。但是不同的存储方法对样本组织中RNA、DNA和蛋白质的影响尚不清楚,尤其是针对DNA甲基化程度和蛋白质溶解现象。

方法:我们采用了RNALater稳定液、生理盐水、冰冻切片包埋剂、不加保护剂的速冻(对照组)四种存储方法。在配对组织样本中分析了RNA的质量(包括RIN测定、mRNA表达量测定)、DNA的质量(包括DNA扩增检测、RASSF1a基因甲基化程度测定),以及蛋白质的质量。除此以外,我们还分析了经过三次循环冻融后样本中RNA的质量。

结果:RNALater稳定液处理组在正常情况下和三次循环冻融后均表现出良好的RNA质量(RIN>8)。但是速冻样本组织显示结果较差,一次循环冻融后RIN>7,三次循环冻融后RIN>6。生理盐水和冰冻切片包埋处理组的结果也不甚理想,一次循环冻融后RIN>7,两侧循环冻融后RIN>6。不同的存储方法对DNA扩增的影响非常小,但对DNA甲基化程度和蛋白质的质量还是存在影响。冰冻切片包埋处理组相较于其他两组似乎更加安全稳定,其实验结果与对照组非常相近。

结论:在预算和效率的双重考量下,我们建议冰冻切片包埋剂作为最佳存储方法,它不但可以在循环冻融的的情况下很好的保存RNA, 也可以保证DNA和蛋白质的安全稳定。

作者:Wang Y, et al.【West China Hospital,Sichuan University,China】

编译:王晶,刘世建【上海儿童医学中心生物样本库】

校审:王耀賡【原文作者,四川大学华西医院】

原文出处:

Wang, Y., et al. (2015). "The Impactof Different Preservation Conditions and Freezing-Thawing Cycles on Quality ofRNA, DNA, and Proteins in Cancer Tissue." Biopreserv Biobank 13(5): 335-347.

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/26484573

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