对于CRISPR介导的基因组编辑，Cas9核酸酶靶向位点特异性引导RNA（gRNA）的靶位点以产生DNA切割。在大多数情况下，为了产生简单的基因敲除，可以将单个gRNA与Cas9一起使用以产生双链断裂（DSB），并通过非同源末端连接（NHEJ）低效修复，导致永久突变 ，如在修复位点产生小插入或缺失。某些突变会产生移码，终止密码子提前出现等，从而导致目的基因功能缺失。如果基因组中两个临近的位点（如小于几kb）同时作为靶向位点，使用双gRNA可能会导致中间区域片段的缺失（即片段敲除）。 继续阅读 →