大家有没有推荐使用的抗淬灭剂? 

问:推荐使用哪些抗荧光淬灭剂?
答:一些常用的和最有效的抗荧光淬灭剂的优缺点比较如下,也提供了部分的商业来源以及共聚焦显微镜用户的意见和评价。
1.p-phenylenediamine (PPD)
  尽管它是最有效的抗淬灭剂之一,但对光和热都有较强的敏感性,而且具有毒性,后者也限制了在体内研究的应用。Krenik 等(1989)建议最理想的 PPD 抗淬灭剂混合液配方是:90% 甘油、10% PBS,其中 PPD 的浓度在(2~7)mM 之间,最终pH值为 8.5~9.0。
2.n-propyl gallate (NPG)
  NPG 无毒性,对光和热稳定,但抗漂白效果不如 PPD,可用于体内研究。推荐浓度在(3~9)mM,用甘油配置效果也不错。配置的方法在FAQ的后部分。
3. 1,4-diazobicyclo[2,2,2]-octane (DABCO)
  DABCO是一种不电离的、稳定的抗淬灭剂,价格便宜而且容易使用。配置方法在 FAQ 的后部分。
4.Ascorbic acid (Vitamin C)
5.Vectashield
  公司描述:具有在显微镜观察中阻止荧光的丢失并在长期储存过程中保持抗荧光淬灭的能力。抑制荧光素的漂白,例如:Texas Red , Rhodamine , AMCA 和其他的荧光染料。特别的是,比甘油缓冲液、聚乙烯醇固定液或者其他含有普通抗荧光淬灭剂的固定液更加稳定,光学清晰度更高。
Vector Laboratories, Inc.
30 Ingold Road,
Burlingame, CA 94010 USA
Tel: (415) 697-3600
Fax: (415) 697-0339
6.SlowFade
  公司描述:SlowFade 的原始配方(S-2828)可将荧光素的荧光淬灭速率减小到零。尤其适用于激光扫描共聚焦显微镜的定量测定,因为其在测定时往往要求激发光强度较强,而且采集时间也较长。SlowFade 试剂可使荧光素的有效荧光发射扩大 50 倍以上,用该试剂封片后,细胞和组织中的荧光信号可保持两年之久。原始的 SlowFade 配方实际上可使荧光素的荧光完全淬灭,也可使 Cascade Blue 和 Alexa Fluor 350 荧光团的荧光几乎完全淬灭。
Molecular Probes, Inc.
P.O. Box 22010 Eugene, OR 97402-0414 USA
Tel: (503) 465-8300
FAX: (503) 344-6504
7.SlowFade Light
  为了克服上述的局限,分子探针公司的研究人员又研制了 SlowFade Light 抗荧光淬灭试剂盒。该抗荧光淬灭剂的配方使荧光素的淬灭速率降低 5 倍,而荧光素的初始荧光强度没有显著降低,因此使光学显微镜的信噪比显著提高。此外,对 Cascade Blue, Alexa Fluor 350, tetramethylrhodamine 和 Texas Red 的淬灭也达到最小。实际上,SlowFade Light 抗荧光淬灭剂试剂盒可将 Cascade Blue 的淬灭速率几乎降到零,而其发射强度仅降低约 30%。
问:DABCO抗荧光淬灭封片剂的配方是什么?
答:
DABCO 储藏液
1.在 60℃ 下,溶解 2 克 DABCO(抗荧光淬灭剂)于 90ml 甘油中,15-30 分钟。
2.加 10 ml 1M Tris-HCl,pH 7.5
3.用 5M HCl 调节 pH 值到 8.0
4.冷却到室温
5.加 100 ml 20% thimerosal(溶解于水)
6.可选:加 50 ml PI (储液:溶于水的 1 mg/ml PI )
7.4℃ 于棕色瓶或箔纸包裹的瓶子中避光保存
缩写:
PI = propidium iodide
PI – 激发光与发射光与罗丹明相似 – 用 488 nm 或者 514 nm 的激发光 – 长通 570 nm 或者 600 nm 的发射滤片
DABCO = 1,4-二偶氮双环[2,2,2]-辛烷 
Ordering (Sigma) :
D2522 DABCO, 25g
T5125 thimerosal, 10g
P4170 PI, 10mg
问:N -丙基没食子酸盐(n-propyl gallate ,NPG)抗荧光淬灭封片剂的配方是什么?
答:
溶于甘油的 5%N -丙基没食子酸盐
1.于 50 ml 试管中,加 5% N -丙基没食子酸盐到 25 ml 甘油中
2.摇晃混合过夜(室温或者 4℃)
3.使用之前静置一天,让溶液中的气泡跑掉
4.4℃ 于棕色瓶或箔纸包裹的瓶子中避光保存

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